Electroforese bidimensional no cancro colo-rectal em hipóxia e normóxia: Optimização de procedimento para MALDI-TOF/TOF

Abstract

O carcinoma colo-rectal é o terceiro tipo de cancro mais diagnosticado nos homens e o segundo nas mulheres em todo o mundo. Em Portugal, é o segundo mais incidente, logo a seguir ao cancro da próstata nos homens e ao da mama nas mulheres. A hipóxia tumoral, estado de reduzida pressão parcial de oxigénio nos tecidos, constitui uma das principais causas de resistência ao tratamento anti-tumoral. Esta condição está fortemente associada à propagação, progressão maligna e à resistência terapêutica nos tumores sólidos malignos, tornando-o um indicador de um mau prognóstico. Assim, é de extrema importância a compreensão dos mecanismos adaptativos das células tumorais a este tipo de microambiente. O objectivo deste trabalho consiste na optimização de um método de separação de proteínas para desenvolvimento de um método não invasivo de diagnóstico da hipóxia tumoral que forneça a informação necessária para melhor compreender a resposta tumoral à hipóxia e estabelecer um plano de tratamento. Inicialmente prepararam-se extractos de proteínas de três linhas celulares diferentes de carcinoma colo-rectal humano (WiDr, C2BBe1 e LS1034) em condições de hipóxia e normóxia. Posteriormente, recorrendo a técnicas de separação que sofreram um longo e complexo processo de optimização separaram-se as proteínas pela sua carga, através de focagens isoeléctricas e peso molecular por electroforeses bidimensionais (2D). A informação obtida com estas metodologias, permite traçar um perfil de expressão protéica de modo a estudar as características adaptativas das células à hipóxia. Os resultados sugerem que todo o processo até a obtenção dos spots que representam a expressão das proteínas está optimizado e ainda permite afirmar que de facto há uma resposta celular a este microambiente tumoral com diminuída pressão parcial de oxigénio. É ainda possível verificar através da análise de resultados, XIII que as linhas celulares provenientes do cólon (WiDr e C2BBe1) apresentam uma menor expressão de proteínas em ambientes de hipóxia e que a linha celular proveniente do ceco (LS1034) aumenta a expressão protéica sob as mesmas condições.