Fatores condicionantes na análise de etanol, metanol, 2-propanol e acetona em amostras sanguíneas

Abstract

The analysis of volatile organic compounds (VOC) present in biological matrices such as blood is carried out quite frequently in the Chemistry and Forensic Toxicology laboratories of the National Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences. Despite being highly relevant analytical determinations, the fact that they are volatile compounds makes their analysis difficult, and it must be ensured that no losses occur, which compromise the analysis and, consequently, the legal process.This study aimed to address different situations such as the collection of different sample volumes, storage temperatures in more than one analysis of the same sample in order to portray the procedure addressed for the daily routine in a forensic laboratory. For this, it was important to study the various factors simultaneously, over a certain period of time, and thus verify how the determination of the different substances studied, ethanol, methanol, 2-propanol and acetone, could be affected.A total of 538,8 mL of white blood was spiked, distributed into 96 tubes with different volumes (3, 6 e 9 mL) to which a mass of 0,1 g NaF was added. The samples were subject to a two temperatures: -20 oC and 5-6 oC, and were stored for a period of 30 days and analyzed on days 0, 15 and 30.To carry out the work, an Agilent 6890N gas chromatograph with a flame ionization detector and an Agilent G1898 fixed volume headspace injector (HS-GC-FID) were used. The results obtained for the four compounds under study were analyzed individually. The difference in concentration obtained in the three periods of analysis, the percentage difference, was calculated and a statistical comparison was made using the Student t-test, with a significance level of 5%.Overall, across all sets of samples, it was found that after a 30-day storage period there were significant differences in the concentration of the four compounds. Acetone was the compound for which the concentration drop was highest.In the case of ethanol, there were no significant changes in concentration after a period of 30 days in the case of samples of smaller and intermediate volume, for the concentration of 0,50 g/L, when stored at -20 oC. The same was verified for methanol in high volume, at a concentration of 0,50 g / L, when stored at 5-6 oC.In some samples for ethanol it was possible to verify the influence of the previous opening of the tube.

A análise de compostos orgânicos voláteis (VOC) presentes em matrizes biológicas como o sangue, é realizada com bastante frequência nos laboratórios de Química e Toxicologia Forense do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses. Apesar de serem determinações analíticas de grande relevância, o facto de serem compostos voláteis dificulta a sua análise, devendo garantir-se que não ocorrem perdas, que comprometem a análise e consequentemente, o processo legal. O presente trabalho teve como objetivo abordar diferentes situações como a colheita de diferentes volumes de amostra, temperaturas de armazenamento em mais do que uma análise da mesma amostra de forma a retratar o procedimento abordado para a rotina diária num laboratório forense. Para isso foi importante estudar os vários fatores em simultâneo, durante um certo período de tempo, e assim, verificar de que forma poderá ser afetada a determinação das diferentes substâncias estudadas, o etanol, o metanol, o 2-propanol e a acetona. Foram fortificados 538,8 mL de sangue branco, distribuídos por 96 tubos com volumes diferentes (3, 6 e 9 mL) aos quais se adicionou uma massa de 0,1 g de NaF. As amostras de ensaio foram sujeitas a duas temperaturas de armazenamento: a -20 oC e a 5-6 oC, por um período de 30 dias e analisadas aos dias 0, 15 e 30.Para analisar as amostras, foi utilizado um cromatógrafo de gás Agilent 6890N com detetor de ionização em chama e um injetor headspace de volume fixo Agilent G1898 (HS-GC-FID). Os resultados obtidos para os quatro compostos em estudo foram analisados individualmente. Foi calculada a diferença da concentração obtida nos três períodos de análise, a diferença percentual e feita a comparação estatística com o teste t-Student emparelhado, com um nível de significância de 5%. Na generalidade em todos os conjuntos de amostras, verificou-se que após um período de 30 dias de armazenamento houve diferenças significativas na concentração dos quatro compostos. A acetona foi o composto para o qual a diminuição de concentração foi mais elevada. No caso de etanol não se registaram alterações significativas de concentração após um período de 30 dias no caso de amostras de menor volume e de volume intermédio, para a concentração 0,50 g/L, quando armazenadas a -20 oC. O mesmo foi verificado para o metanol nas amostras de volume elevado, para a concentração 0,50 g/L, quando armazenadas a 5-6 oC. Em algumas amostras para o etanol foi possível verificar a influência da abertura prévia do tubo.