XPC down-regulation in cisplatin-exposed HeLa cells and its implications on cervical cancer therapy

Abstract

INTRODUCTION: Cisplatin(CDDP)-based chemotherapy remains the standard treatment for patients with advanced or recurrent cervical cancer (CC) not amenable to curative therapies. Metastatic CC is still associated with poor survival rates, partly due to CDDP-resistance (CPR), which seriously compromises the efficacy of treatment. XPC, a member of the nucleotide excision repair (NER) pathway, identifies CDDP adducts and may have a role in CPR, along with Akt and AMPK, as regulators of XPC expression. OBJECTIVES: The aim of this study was to elucidate the patterns of expression of XPC, Akt and AMPK in CDDP-exposed HeLa cells. METHODS: Cell proliferation was measured by the sulforhodamine B cytotoxicity assay, allowing the establishment of values for the concentration of CDDP that inhibits 20%, 50% and 80% of cell proliferation (IC20, IC50 and IC80, respectively) in HeLa cells. Analysis of XPC, active and total Akt and active and total AMPK expression in CDDP-exposed cells was carried out by western blotting and immunocytochemistry, the latter analysis not including total AMPK. RESULTS: XPC expression significantly decreased after exposure to IC50 of CDDP for 48 hours (p<0.05), when compared to control cells. Active Akt expression significantly decreased (p<0.05) in HeLa cells after exposure to IC80 of CDDP, when compared to control cells. No significant changes were observed in total Akt expression after CDDP-exposure. There was a non-significant decrease in the expression of active AMPK after exposure to IC80 of CDDP for 48 hours, when compared with the other conditions, whereas total AMPK expression did not significantly change after CDDP-exposure. Preliminary results of immunocytochemistry were not conclusive but appear to be partially in line with the results observed by western blot. CONCLUSION: Our results suggest that XPC is down-regulated in CDDP-exposed HeLa cells, potentially in an Akt-independent manner. Additionally, AMPK appears to be down-regulated in HeLa cells exposed to higher concentrations of CDDP. Further studies are needed to uncover the role of these proteins in CC pathways involved in CDDP-response and CPR.

INTRODUÇÃO: A quimioterapia baseada em cisplatina (CDDP) permanece como o padrão terapêutico para doentes com cancro do colo do útero (CC) avançado ou recorrente não passível de tratamento curativo. O CC metastático ainda se associa a baixas taxas de sobrevivência, parcialmente devido à resistência à CDDP (CPR), que compromete seriamente a eficácia do tratamento. A proteína XPC, membro da via de reparação por excisão de nucleótidos (NER), identifica aductos de CDDP e poderá ter um papel na CPR, em conjunto com a Akt e AMPK, como reguladoras da expressão da XPC. OBJETIVOS: O objetivo deste estudo foi avaliar os padrões de expressão de XPC, Akt e AMPK em células HeLa expostas a CDDP. MÉTODOS: A proliferação celular foi quantificada através do ensaio da sulforodamina B, um ensaio colorimétrico que permitiu estabelecer os valores da concentração de CDDP que inibe 20%, 50% e 80% da proliferação celular (IC20, IC50 e IC80, respetivamente) das células HeLa. A análise da expressão de XPC, Akt ativa e total e AMPK ativa e total em células expostas à CDDP por 48 horas foi realizada por western blotting e imunocitoquímica. RESULTADOS: A expressão de XPC nas células HeLa diminuiu significativamente após exposição à concentração correspondente ao IC50 de CDDP por 48 horas (p<0,05), quando comparada com células controlo. Paralelamente, a expressão de Akt ativa diminuiu significativamente (p<0,05) após exposição a IC80 de CDDP, quando comparada com células controlo. Não se verificaram alterações significativas na expressão de Akt total após exposição a CDDP. Registou-se ainda uma tendência para diminuição da expressão de AMPK ativa após exposição a IC80 de CDDP, em comparação com as restantes condições, enquanto que a expressão de AMPK total não se alterou significativamente após exposição a CDDP. Apesar de preliminares, os resultados de imunocitoquímica aparentam ser parcialmente concordantes com os resultados observados por western blot. CONCLUSÃO: Os resultados obtidos sugerem que a XPC se apresenta sub-regulada em células HeLa expostas a CDDP, potencialmente por um mecanismo independente da Akt. Adicionalmente, a AMPK parece estar sub-regulada em células HeLa expostas a concentrações mais elevadas de CDDP. São necessários mais estudos para que se possa melhor esclarecer o papel destas proteínas em vias de CC envolvidas na resposta à CDDP e CPR.