Please use this identifier to cite or link to this item:
https://hdl.handle.net/10316/31299
Title: | Role of Sirtuin 3 on Doxorubicin-induced Toxicity on H9c2 Cardiomyoblasts | Authors: | Coelho, Ana Raquel Ligeiro | Orientador: | Oliveira, Paulo Jorge G. S. da Silva Moreno, António |
Keywords: | Sirtuína 3; Doxorrubicina; Cardiotoxicidade; Morte celular e protecção | Issue Date: | 2014 | Citation: | COELHO, Ana Raquel Ligeiro - Role of Sirtuin 3 on Doxorubicin-induced Toxicity on H9c2 Cardiomyoblasts. Coimbra : [s.n.], 2014. Dissertação de mestrado em Biologia Celular e Molecular | Place of publication or event: | Coimbra | Abstract: | A antraciclina Doxorrubicina (DOX) é um dos mais usados agentes antineoplásicos. No
entanto, o tratamento com este composto está associado com cardiotoxicidade, que é
dependente da dose e da sua acumulação. A mitocondrial Sirtuína 3 (Sirt3) é a maior
deacetilase mitocondrial, modulando diversas vias, tal como a apoptose e o
metabolismo celular. Assim a nossa hipótese é que a actividade da Sirt3 diminui a
cardiotoxicidade induzida pela DOX. Os cardiomioblastos H9c2 foram transfectados
com siRNA e plasmídeos para produzir células com Sirt3 silenciada e sobreexpressa,
respectivamente. A toxicidade da DOX (0.5 e 1 µM) foi avaliada pelo ensaio da
Sulforodamina B e por citometria de fluxo. A despolarização mitocondrial e a
produção do anião superóxido foi determinada por microscopia de fluorescência e o
conteúdo de proteínas específicas por western blot. A sobre e sub-expressão da Sirt3 foi
confirmada por western blot e RT-PCR. A toxicidade da DOX envolveu a indução de
morte celular em todos os grupos. O aumento do conteúdo de Sirt3 mediado pela
sobreexpressão parece diminuir a toxicidade da DOX, maioritariamente pela
manutenção da integridade da rede mitocondrial e redução do stress oxidativo. Por
outro lado, a p53 parece ser um alvo directo da Sirt3 e a protecção conferida contra a
morte celular pela Sirt3 pode ser relacionada com esta proteína. The anthracycline Doxorubicin (DOX) is one of the most widely used anti-neoplastic agents. However, treatment with this drug is associated with a cumulative and dose dependent cardiotoxicity. Mitochondrial Sirtuin 3 (Sirt3) is the major mitochondrial deacetylase, modulating several pathways, such as apoptosis and metabolism. Thus, our hypothesis is that mitochondrial Sirt3 activity decreases DOX-induced cardiotoxicity. H9c2 cardiomyoblasts were transfected with siRNA and a plasmid construct to produce Sirt3 knock-down and Sirt3 overexpressing cells, respectively. DOX (0.5µM and 1µM) toxicity was evaluated by the Sulforhodamine B assay and by flow cytometry using the Life/Death assay. Mitochondrial depolarization and superoxide production was determined by fluorescence microscopy and content in specific proteins by western blot. Sirt3 overexpression or knock-down was confirmed by Western Blot and qRT-PCR. In all experimental groups, DOX induced cell death. Increase in Sirt3 content by transfection-mediated overexpression appeared to decrease DOX toxicity, most by maintaining the integrity of mitochondrial network and reducing oxidative stress. On the other hand, p53 seems to be a direct target of Sirt3 and the protection against cell death conferred by Sirt3 could be related to this protein. |
Description: | Dissertação de mestrado em Biologia Celular e Molecular, apresentada ao Departamento de Ciências da Vida da Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra. | URI: | https://hdl.handle.net/10316/31299 | Rights: | openAccess |
Appears in Collections: | UC - Dissertações de Mestrado FCTUC Ciências da Vida - Teses de Mestrado |
Files in This Item:
File | Description | Size | Format | |
---|---|---|---|---|
Tese_Ana_Raquel.pdf | 3.6 MB | Adobe PDF | View/Open |
Page view(s)
256
checked on Aug 27, 2024
Download(s)
192
checked on Aug 27, 2024
Google ScholarTM
Check
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.