Desenvolvimento de um método analítico para quantificação de catecolaminas por LC-MS/MS

Abstract

Estudos recentes indicam que um dé ce da dopamina no cérebro é a principal causa da doença de Parkinson. A síntese do metabolismo da dopamina ocorre no cérebro e fora deste, nomeadamente no plasma sanguíneo e no tracto gastrointestinal. O metabolismo da dopamina é constituído por L-tirosina, levodopa, dopamina, ácido 3,4-dihidróxifenilacético, 3-metoxitiramina e por último ácido homovan ílico. A biossíntese da dopamina inicia-se na L-tirosina, e por meio de enzimas termina na formação da dopamina. A degradação da dopamina ocorre através de enzimas originando o ácido homovanílico. O presente trabalho descreve algumas das fases mais relevantes no desenvolvimento e validação de métodos analíticos baseados em LC-MS/MS para a posterior quanti cação das quatro catecolaminas (L-tirosina, levodopa, dopamina e 3-metoxitiramina). Para garantir a abilidade dos resultados vários parâmetros de validação foram de nidos: identi cação, selectividade, calibração, limiares analíticos, precisão, exactidão e carry-over. Na análise dos espectros de fragmentação foi possível obter três fragmentos usados para quanti car cada analito. A selectividade foi comprovada para todos os compostos tendo um limite de quanti cação de 0,87 0,92 0,48 0,46 nM para a L-tirosina, levodopa, dopamina e 3-metoxitiramina. Todos os fragmentos de cada analito, durante 3 dias diferentes, demonstraram boa linearidade nas gamas de trabalho da L-tirosina (0,05 a 0,250 M), levodopa (0,1 a 0,5 M), dopamina (0,025 a 0,125 M) e 3-metoxitiramina (0,025 a 0,125 M). Ao nível da precisão e exactidão demonstraram na L-DOPA e dopamina apenas um analito de ambos apresenta uma transição que possa ser usada para quanti cação, nomeadamente 198,03/135,01 e 154,20/65,07. Quanto à 3-MT qualquer uma das 3 transições poderá ser usada para quanti car, enquanto na L-tirosina não se poderá usar nenhuma das 3 transições para quanti cação sendo necessário mais testes relativos a este analito. Por último não ocorreu qualquer efeito de carry-over em qualquer fragmento dos analitos em questão.