Prospecção do potencial anti-glicação de fitoquímicos via ensaios in vitro

Abstract

Os produtos finais de glicação avançada (AGE) são compostos formados via reação não enzimática entre os grupos carbonil de açúcares redutores (glicose, frutose) e os grupos amino livres em proteínas. Estes compostos participam da formação de ligações cruzadas entre proteínas, gerando diversos intermediários oxidados que culminam na indução de estresse oxidativo observado tanto na circulação sanguínea quanto no interior das células. Tais ligações modificam as estruturas proteicas e prejudicam sua funcionalidade, afetando o seu turnover, processos de reconhecimento entre ligante e receptor, atividade enzimática, capacidade de transporte, propriedades físico-químicas, dentre outras funções. Por esta razão, a glicação de proteínas, bem como a formação excessiva de AGE e seu acúmulo nos tecidos, contribuem de maneira significativa para o estabelecimento das complicações do diabetes mellitus (DM), tais como retinopatia, nefropatia e neuropatia diabéticas, bem como as complicações cardiovasculares. Este projeto teve como objetivo o estudo do potencial anti-glicação do ácido para-cumárico e seus derivados: ácido ferúlico, ácido cafeico, curcumina (associação de duas unidades de ácido ferúlico) e ácido rosmarínico (associação de duas unidades de ácido cafeico), via ensaios realizados em sistema-modelo de glicação proteica in vitro. Os compostos foram incubados a 37°C na presença de albumina e glicose, durante 7 e 14 dias. Alíquotas das incubações foram retiradas para os seguintes ensaios: estimativa de AGE totais via fluorescência, quantificação de proteínas carboniladas (PCO) e quantificação de grupamentos tiol (-SH) via espectrofotometria, e separação eletroforética de proteínas em SDS-PAGE para estudo de formação de ligações cruzadas (cross-linking). Os resultados demonstraram que o sistema-modelo de glicação in vitro foi responsivo às intervenções capazes de inibir as modificações na estrutura da albumina promovidas pela glicose. Todos os compostos derivados do ácido p-cumárico apresentaram algum tipo de efeito protetor, de modo que as moléculas com maior hidroxilação (ácidos cafeico e rosmarínico) apresentaram melhor resposta na prevenção/redução na formação de AGE totais e PCO, enquanto que aquelas com maior metoxilação (ácido ferúlico e curcumina) apresentaram melhor ação protetora em relação à geração de cross-linking. Estes resultados sugerem que a estrutura química do fitoquímico tem influência no tipo de potencial anti-glicação de derivados do ácido para-cumárico.