Validação de um método analítico para a determinação do etanol em humor vítreo em âmbito forense

Abstract

O etanol (CH3CH2OH) é uma substância consumida desde tempos remotos, que pode ser obtido pela fermentação de açúcar existente em produtos de origem vegetal tais como frutos, caules e raízes. A sua vasta utilização em bebidas alcoólicas, na indústria farmacêutica, na produção de perfumes e/ou como solvente químico, torna-o uma das substâncias atualmente mais utilizadas. Embora considerada uma substância psicotrópica pela sua atuação ao nível do sistema nervoso central (SNC), a sua comercialização é permitida e o seu consumo quase que incentivado. Uma elevada taxa de álcool no sangue, quando associada a atividades como a condução, aumenta significativamente o risco de ocorrência de acidentes graves. Por essa razão, a sua deteção e quantificação no sangue é muito importante em âmbito forense e corresponde, por esse motivo, a uma percentagem muito significativa do total das análises requisitadas ao Serviço de Química e Toxicologia Forenses (SQTF) do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. (INMLCF). A tolerância, do ponto de vista social, relativamente ao seu consumo, resulta também numa maior contestação por parte dos indivíduos envolvidos em situações de condução sob o efeito do álcool. Apesar de ser preferível que a deteção e quantificação do etanol seja feita em sangue, existem casos em que não se dispõe deste tipo de amostra para análise (e.g. cadáver em elevado estado de decomposição). O humor vítreo surge como uma matriz alternativa, devido às suas características e localização anatómica. O objetivo deste trabalho foi o de validar um método analítico para deteção e quantificação do etanol em amostras de humor vítreo. Estes ensaios são efectuados no SQTF com recurso a HS-GC/FID, usando uma solução aquosa de n-propanol (100 mg/L) como padrão interno. Este método, amplamente utilizado em toxicologia forense, permite cumprir os requisitos e critérios definidos para este tipo de análises. A separação cromatográfica foi realizada utilizando duas colunas capilares com fases estacionárias de diferentes polaridades, a fim de garantir o cumprimento dos critérios de identificação recomendados para este tipo de análise. O método traduziu-se numa boa separação cromatográfica em ambos os sistemas GC/FID utilizados neste trabalho com o etanol e o padrão interno a eluírem entre os 5 e os 6 min, respetivamente. O processo de validação consistiu na avaliação objetiva de cada um dos parâmetros estabelecidos no procedimento de validação de métodos quantitativos em vigor no SQTF da Delegação do Centro do INMLCF. Após a validação, este método foi aplicado a amostras reais de humor vítreo que foram selecionadas entre os processos enviados ao SQTF para a realização de análises de rotina. Embora os dois equipamentos utilizados possuam diferentes modos de injeção, os resultados obtidos foram concordantes, o que permitiu também obter ilações positivas sobre a robustez do ensaio.

Ethanol (CH3CH2OH) is a substance that is consumed since ancient times. It is obtained by fermentation of sugar existing in vegetable products such as fruits, stems and roots. Its widespread use in alcoholic beverages, pharmaceutical industries, in the production of perfumes and / or as chemical solvents, explains why it is one of the substances most used by mankind. Although considered a psychotropic substance acting mainly in the central nervous system, their marketing is permitted and consumption almost encouraged. The high level of alcohol in the blood, when associated to activities such as driving, triggers serious problems. Therefore, their detection and quantification in blood is very important in forensics and corresponds not only to the most significant proportion of the analyzes required to the Service of Chemistry and Forensic Toxicology of the National Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences, but also with greater appeal by individuals involved. Although being preferable that the detection and quantitation of ethanol is performed in blood, there are cases where this type of sample is not available for analysis (eg high decomposition of the body), so the vitreous humor appears as an alternative due to their characteristics and anatomical location. The aim of this study was the validation of an analytical method for detection and quantification of ethanol in samples of vitreous humor. The determination of ethanol in samples of vitreous humor is made in the Service of Chemistry and Forensic Toxicology using HS-GC/FID, as gas chromatography is a widely used technique in the field of chemistry and forensic toxicology, responding to almost all the class of toxicologically relevant compounds. Prior to chromatographic analysis, all samples, including the calibrators, were diluted. For this purpose, 100 μL of vitreous humor were diluted in 1 ml of n-propanol aqueous solution (100 mg/L), used as internal standard. The chromatographic separation was performed using two capillary columns with different polarities in order to ensure compliance with the identification criteria recommended for this type of analysis. The method provides good separation on both chromatographic equipments. The tested substance and the internal standard were eluted in a time interval of 5 min for the GCFI001 and 6 min for the GCFI002. The validation process included the evaluation of each of the parameters established for the validation procedure of quantitative methods adopted in the Service of Chemistry and Forensic Toxicology of the National Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences – Centre Branch. After validation of the method, it was applied to real samples of vitreous humor selected among the routine analyses from the Service of Chemistry and Forensic Toxicology. Although the two devices have different modes of injection, the results were consistent, which proves that the method provides reliable results and that the requirements for the specific intended use or application have been met.