Estudo da interação da RIF com bicamadas lipídicas

Abstract

Após administração oral um fármaco tem de ultrapassar várias barreiras antes de chegar ao sistema circulatório. Para além do efeito na sua absorção, a distribuição, metabolismo e eliminação (ADME) do fármaco também envolve a interação e/ou permeação através de membranas biológicas. Também a eficácia no local alvo envolve frequentemente interações com a membrana biológica, quer via direta no caso de medicamentos ativos na membrana, quer indiretamente através do aumento ou diminuição da concentração local disponível para interagir com o alvo terapêutico. As membranas biológicas são formadas por uma bicamada lipídica contínua com proteínas incorporadas ou adsorvidas na superfície polar. A barreira de difusão que limita a permeabilidade dos fármacos através da membrana biológica é dada pela bicamada lipídica. Para a maioria dos medicamentos (hidrofóbicos e amfifilicos) as interações não especificas também são estabelecidas com a bicamada lipídica da membrana biológica. Por conseguinte, é importante caracterizar as interações estabelecidas entre o fármaco e sistemas modelo que mimetizem a porção da bicamada lipídica da membrana biológica, bem como o efeito do fármaco nas propriedades da bicamada. Vesículas unilamelares largas (LUV’S) são sistemas modelo excelentes, uma vez que são estáveis e podem ser preparados com composições distintas de lípidos que mimetizem as propriedades relevantes da membrana biológica (nomeadamente as suas propriedades dinâmicas e electroestáticas) Neste trabalho caraterizámos as interações da Rifampicina (RIF) com LUV’S preparados com POPC puro (mimetizando as membranas em geral) e a partir de uma mistura de POPE:POPC:POPG a 50:30:20 molar % (como um modelo de uma membrana bacteriana). A Rifampicina é um antibiótico amplamente usado na tratamento da tuberculose, atuando na inibição da síntese do RNA dependente do DNA causando a destruição das células bacterianas. A interação da RIF com a bicamada lipídica foi estudada através de calorimetria de titulação isotérmica (ITC), com a caracterização do coeficiente de partição e a variação da entalpia associada para diferentes concentrações locais do fármaco, mudanças no estado de ionização da RIF devido à interação com a bicamada lipídica, e informação qualitativa sobre a velocidade de permeação através da bicamada. Um ensaio preliminar para determinar o coeficiente de partição foi efetuado utilizando espectroscopia de absorção UV/Visível. Variações nas propriedades da bicamada lipídica devido à presença de diferentes concentrações locais de RIF foram avaliadas por dispersão dinâmica de luz e através do efeito na velocidade de permeação da carboxifluoresceína. A Rifampicina é um antibiótico amplamente usado na tratamento da tuberculose, atuando na inibição da síntese do RNA dependente do DNA causando a destruição das células bacterianas. A interação da RIF com a bicamada lipídica foi estudada através de calorimetria de titulação isotérmica (ITC), com a caracterização do coeficiente de partição e a variação da entalpia associada para diferentes concentrações locais do fármaco, mudanças no estado de ionização da RIF devido à interação com a bicamada lipídica, e informação qualitativa sobre a velocidade de permeação através da bicamada. Um ensaio preliminar para determinar o coeficiente de partição foi efectuado utilizando espectroscopia de absorção UV/Visível. Variações nas propriedades da bicamada lipídica devido à presença de diferentes concentrações locais de RIF foram avaliadas por espalhamento dinâmico de luz e através do efeito da velocidade de permeação da carboxifluoresceína.