Estudo da etiologia do Autismo utilizando as técnicas de FISH e MLPA

Abstract

O autismo trata-se de uma síndrome comportamental complexa, em que o paciente apresenta dificuldades de interacção social e de comunicação, assim como comportamentos repetitivos e estereotipados, havendo uma prevalência de cerca de 34/10000 indivíduos. Nesta patologia, os factores genéticos representam um papel importante, não se sabendo ainda quais os genes associados, no entanto, existem determinadas regiões cromossómicas mais susceptíveis, como por exemplo, a região proximal do braço longo do cromossoma 15 (15q11-q13). Aproximadamente, 1% a 4% das crianças que têm autismo apresentam anomalias citogenéticas nesta região. Como a citogenética convencional apenas detecta delecções ou duplicações com tamanho entre 3-5 Mb é necessário recorrer a técnicas de citogenética molecular, como a Fluorescent in situ Hybridization (FISH), que tem sido amplamente usada na deteccção de anomalias cromossómicas em pacientes autistas. Recentemente, têm surgido novas metodologias, como a Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification (MLPA) que tem vindo a responder às necessidades exigidas pelos novos avanços da ciência. O objectivo deste trabalho foi relacionar o autismo com alterações cromossómicas na região 15q11.2, e assim, avaliar a sua frequência na etiologia do autismo. Dos 556 casos autistas que foram referenciados ao laboratório, 429 foram estudados pela metodologia de FISH com as sondas para os loci SNRPN e UBE3A. Desses, 134 foram ainda analisados pela técnica de Methylation-Specific Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MS-MLPA) com o kit ME028. Dos 429 casos, foram encontradas um total de 7 alterações: duas duplicações intersticiais da região 15q11-q13, duas triplicações intersticiais desta mesma região, um cromossoma supranumerário derivado do cromossoma 15, um marcador do cromossoma 15 em mosaico, e uma microduplicação localizada na região entre os pontos de quebra BP1 e BP2. A frequência destas anomalias cromossómicas neste estudo (1,6%) está dentro da variabilidade reportada noutros trabalhos e são uma causa significante para a etiologia do autismo. Estas descobertas indicam que a MS-MLPA é um método eficiente para o screening deste tipo de anomalias cromossómicas, sendo um método simples, rápido,sensível e económico, permitindo a detecção simultânea de alterações no número de cópias e nos padrões de metilação.

Autism is a complex behavioral syndrome, in which the patient presents deficit in social interaction and communication and has stereotyped and repetitive behaviors. Autism has a prevalence of 34/10000 individuals. In this pathology, genetic factors play a significant role, and although the autism associated genes are not yet known, there are chromosomes regions such as the proximal region of the long arm of the chromosome 15 (15q11-q13) that share a certain susceptibilities. Approximately 1 to 4% of the children who have autism present cytogenetic abnormalities in this region. As the convencional cytogenetic methods only detect deletions or duplications of 3-5 Mb in size, researchers usually use molecular cytogenetic techniques such as the Fluorescent in situ Hybridization (FISH) to evaluate them. Recently, new methodologies have arise such as the Multiplex Ligationdependent Probe Amplification (MLPA), which has several advantages in the diagnosis of such chromosomal abnormalities. The aim of this work was to find an association between autism and chromosomal alterations in the 15q11.2 region and to evaluate its prevalence in the autism etiology. 556 cases of autism have been reported to the laboratory. 429 were studied by FISH technique with probes to the SNRPN and UBE3A loci. Of these, 134 were analyzed by Methylation-Specific Multiplex ligation-dependent Probe Amplification (MS-MLPA) technique with the ME028 kit.Of the 429 cases, we found two interstitial duplications and two interstitial triplications in the region 15q11-q13, one supernumerary marker chromosome derived from chromosome 15, one supernumerary mosaic marker chromosome 15 and a microduplication of the region between breakpoint BP1 and breakpoint BP2. The frequency of these chromosomal abnormalities in this study (1,6%) is within the reported frequencies in other studies. These findings also showed that the MSMLPA is an efficient method for the screening of this type of chromosomal abnormalities, being simple, rapid, sensitive, economic and allowing the simultaneous detection of copy number alterations as well as methylation patterns.