Role of AKT–regulated miRNAs in Non Small Cell Lung Cancer (NSCLC)

Abstract

O Cancro é a maior causa de morte em países desenvolvidos e a segunda em países em desenvolvimento. O cancro do pulmão, em específico, foi a forma de cancro mais comum diagnosticada assim como a maior causa de morte por cancro em pessoas do sexo masculino em 2008, contando com 13% (1,6 milhões) de casos totais e 18% (1,4 milhões) de mortes. O cancro do pulmão de não-pequenas células é a forma mais comum de cancro do pulmão, sendo dividido em três subtipos histológicos, adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas e carcinoma de grandes células. Um acúmulo de evidências revela que os miRNAs estão bastante desregulados em cancro do pulmão de não-pequenas células. Estudos recentes, mostram que os miRNAs podem ser utilizados para descriminar entre os diversos histótipos de cancro e que a caracterização de miRNAs expressos pode ser útil na previsão de prognósticos e recorrência em fases iniciais de cancro do pulmão de não-pequenas células. Os miRNAs são RNAs de cadeia simples com aproximadamente 22 nucleótidos que são gerados de transcritos com forma de hairpin. São considerados reguladores póstranscripcionais da expressão génica e têm revolucionado a compreensão da regulação pós-transcripcional, tendo um grande impacto em modulação de transcriptomas e proteomas, uma vez que influenciam vários processos celulares já investigados. Mudanças nos seus padrões de expressão estão associadas a patologias humanas, como o cancro. A sobre-expressão do hsa-miR-19611, em particular, foi associada com diferentes tipos de cancro, contudo existem artigos que indicam que este miRNA pode actuar como um onco-supressor. O papel deste miRNA na tumorigénese não é claro e os dados presentes na literatura parecem ser específicos para cada linha celular. Antes do início deste projecto, verificou-se a sobre-expressão do hsa-miR-196a1 em 29 amostras de tumores de pulmão e em linhas celulares de diversos histótipos de cancro do pulmão. NCI-H460 interferidas para AKT1 e o seu controlo, SCR, também demonstraram uma expressão diferencial deste miRNA e os níveis mais altos eram expressos em NCI-H460 SCR. Neste projecto foram criadas quatro linhas celulares de modo a avaliar o efeito biológico do hsa-miR-196a e relacioná-lo com a via PI3K/AKT. Foram escolhidos 3 alvos previstos para o hsa-miR-196a1 cuja expressão é negativamente regulada pela via PI3K/AKT: FoxO1, FoxO3 and p27. Apenas FoxO1 e p27 mostraram uma reduzida actividade da luciferase, evidenciando a ligação do miR- 196a aos seus 3’UTR. Os níveis de expressão de todos os mRNAs não se mostraram alterados, mas os níveis proteicos de FoxO1 e p27 mostraram-se reduzidos em células que expressam o vector contendo o hsa-miR-196a e aumentados em células que expressam o vector contendo o anti-miR-196a, indicando uma modulação da síntese proteica destes genes pelo miRNA em estudo. Utilizando este sistema celular é possível observar os efeitos deste miRNA e também relacionar aos resultados obtidos à via PI3K /AKT. Os resultados obtidos apontam para uma regulação da proliferação e migração por este miRNA e a sua sobre – expressão promove estes processos e o seu knockdown tem um efeito negativo nos mesmos. Pelo menos parte dos efeitos observados são devidos à regulação diferencial dos genes inibidos pela activação da via PI3K/AKT