Development and validation of an analytical method for quantification of psychotropic drugs in biological samples by LC-MS/MS

Abstract

De acordo com a organização mundial de saúde, muitas pessoas em todo mundo sofrem de doenças mentais e psicológicas, incluindo depressão e esquizofrenia. O tratamento destas doenças muitas vezes é auxiliado pelo uso de antidepressivos e antipsicóticos. Em 2009, houve um aumento de 52% no uso deste tipo de fármacos psicotrópicos. Devido ao aumento do seu uso e o seu envolvimento em situações de intoxicações e suicídio, a sua detecção em amostras biológicas torna-se cada vez mais uma necessidade. Assim o desenvolvimento de uma metodologia analítica para a identificação e quantificação de fármacos psicotrópicos (citalopram, clozapina e haloperidol) em plasma e pêlo foi o principal objectivo deste trabalho. As amostras de plasma foram processadas com metanol por precipitação de proteínas e as amostras de pêlo foram incubadas com metanol a 45 °C, seguindo-se um passo de limpeza com extração fase sólida. Todas as amostras foram analisadas por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa sequencial (LC-MS/MS) em modo MRM1 com um tempo analitico de 9 minutos. Para garantir a fiabilidade dos resultados analíticos foram definidos parâmetros de validação para este método: selectividade, limites de detecção e quantificação, linearidade, arrastamento2, precisão intermédia, repetibilidade, exactidão, recuperação e efeito matriz. O método provou ser selectivo para todos os compostos, com um limite de quantificação de 0,012; 0,014 e 0,015 pmol/μL para o citalopram, clozapine e haloperidol, respectivamente. Também a linearidade do método foi demonstrada para os intervalos: 0,05 a 5 pmol/μl para o haloperidol; 0,05 a 3 pmol/μl para o citalopram e 0,05 a 2 pmol/μl para a clozapina, com coeficientes determinação (R2) maiores do que 0,998 para todos os compostos. Os limites de quantificação foram: 0,037; 0,044 e 0,045 pmol/μL para o citalopram, clozapina e haloperidol, respectivamente. A precisão intermédia do método apresentou alguns valores altos, 13,7-31,3 %. Contudo na exactidão e repetibilidade, os resultados obtidos encontram-se dentro dos critérios estabelecidos. 1 Do inglês, Multiple Reaction Monitoring 2 Do inglês, carry-over ii |RESUMO Na recuperação do método, a diferentes níveis de concentração, os valores obtidos para o plasma foram de 68,9 a 115,5% e para o pêlo de 8,9 a 45,5%. Em relação ao efeito de matriz foram obtidos valores negativos para o plasma, indicando supressão iónica. E para o pêlo foram obtidos valores positivos, indicando um aumento do sinal da substância analisada. O método desenvolvido foi aplicado em amostras de plasma e pêlo que foram recolhidas de ratinhos (5 réplicas independentes por dia) que foram submetidos a um tratamento com fármacos psicotrópicos (citalopram, clozapina e haloperidol) por diferentes períodos de tempo: 1, 2, 4, 8, 15 e 30 dias. A análise da evolução temporal da quantificação dos três compostos no pêlo revela um aumento na concentração ao longo dos dias com um aumento acentuado no dia 15. A evolução temporal da quantificação do citalopram, clozapina e haloperidol para o plasma foi diferente para cada composto, com um pico máximo no dia 8, dias 1 e 2 e dias 4 e 8 para o citalopram, clozapina e haloperidol, respectivamente. Palavras-chave: fármacos psicotrópicos; plasma; pêlo; LC-MS/MS; quantificação; validação.