Interacção de uma série homóloga de anfifílas fluorescentes com bicamadas lipídicas na fase líquido ordenado

Abstract

O estudo cinético e termodinâmico da interacção de anfifílas fluorescentes com bicamadas lipídicas é essencial, tanto em termos biológicos como farmacológicos, para prever a permeação de fármacos através de membranas biológicas importantes, como por exemplo, a barreira hemato-encefálica. Esta vasta área tem impulsionado o nosso grupo de investigação, nos últimos anos, num estudo extensivo e detalhado no processo de permeação de anfifílas através de membranas com diferentes propriedades (Abreu, Moreno et al. 2004; Sampaio, Moreno et al. 2005; Moreno, Estronca et al. 2006; Cardoso, Martins et al. 2011). De forma a caracterizar a interacção de anfifílas com bicamadas lipídicas, é necessário o conhecimento quantitativo de diferentes constantes de velocidade como a translocação, a inserção e a desorpção, sendo que estas duas últimas definem o coeficiente de partição. A racionalização destes parâmetros permitem modular a velocidade de permeação de uma anfifíla através de uma bicamada lipídica. Neste trabalho de mestrado estudou-se a interacção de uma série homóloga de aminas gordas fluorescentes, o (7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)-acil amina com uma cadeia hidrocarbonada de comprimento n (NBD-Cn), com uma bicamada lipídica composta pela mistura binária equimolar de 1-palmitoil-2-oleoil-snglicero- 3-fosfatidilcolina (POPC) e Colesterol. Ao longo da série homóloga, o grupo hidrofílico (NBD) foi mantido e a razão hidrofílica/hidrofóbica das anfifílas foi modificada através da alteração do comprimento da cadeia hidrocarbonada, Cn (n=8, 10, 12, 14 e 16). O estudo de propriedades físicas, como o rendimento quântico, tempo de vida e anisotropia de fluorescência e a constante de ionização, permite obter detalhes sobre a localização da série homóloga NBD-Cn nas membranas modelo compostas por POPC:Col (1:1). Observou-se que o aumento da cadeia hidrocarbonada não é um factor determinante na anisotropia e no rendimento quântico de fluorescência, enquanto que, para a constante de ionização, verificou-se um crescimento tendencial de 0.3 unidade de pH para as cadeias mais longas. ii A velocidade de translocação da série NBD-Cn foi o parâmetro cinético estudado neste trabalho e a sua a dependência com temperatura permitiu a obtenção da termodinâmica do processo. Observou-se que o aumento da cadeia hidrocarbonada determina uma diminuição na velocidade de translocação de aproximadamente uma ordem de grandeza, a 25ºC, entre o NBD-C10 e o NBD-C16