Estudo da suscetibilidade a antibióticos de enterobactérias isoladas nos Hospitais da Universidade de Coimbra : deteção laboratorial de β-lactamases

Abstract

É de conhecimento geral a importante revolução na saúde mundial, aquando da descoberta dos antibióticos, nomeadamente ao nível do decréscimo do sofrimento causado pelas infeções bacterianas, sendo responsável portanto, por salvar muitas vidas. Todavia, a inserção destes agentes antimicrobianos e o consequente aparecimento de resistências aos mesmos – adquiridas pelas bactérias ao longo dos tempos, fruto da sua adaptação pela contínua exposição – constitui uma das questões de saúde mais problemáticas no âmbito global. O contínuo desenvolvimento e propagação de organismos patológicos resistentes aos agentes antimicrobianos, constitui uma crescente preocupação. Muitos dos avanços da terapêutica medicamentosa do último século podem ter-se perdido por entre a difusão das resistências antimicrobianas. Como resultado, muitas doenças provenientes de infeções poderão, num futuro próximo, tornar-se incontroláveis, espalhando-se por todo o mundo. Na família das Enterobacteriacea, a produção de β-lactamases, nomeadamente de β-lactamases de largo espetro (ESBL – Extended Spectrum Beta Lactamases), constitui um importante mecanismo de resistência aos antibióticos β-lactâmicos. Neste trabalho, estudaram-se 204 isolados multirresistentes da família Enterobacteriacea provenientes do Hospital da Universidade de Coimbra. Procedeuse à pesquisa de β-lactamases ESBLs e Amp C pelo método fenotípico de Kirby-Bauer, utilizando-se posteriormente o método molecular da reação da polimerase em cadeia (PCR) seguido de eletroforese para identificar as β-lactamases existentes (TEM, SHV e CTX-M). Por fim, procedeu-se à genotipagem dos isolados com o objetivo de verificar a variabilidade genética existente. A prevalência de ESBL e Amp C pelo método fenotípico por espécies foi: apenas Amp C em 100% dos isolados de Serratia sp, em 50% dos isolados de Citrobacter sp, em 50% dos isolados de Morganella sp, em 40% dos isolados de Enterobacter cloacae e em 45,54% dos isolados de Enterobacter aerogenes; apenas ESBL em 59,52% dos isolados de Escherichia coli, em 70,18% dos isolados de Klebsiella pneumoniae, em 100% dos isolados de Enterobacter gergoviae, em 20% dos isolados de Enterobacter cloacae e em 18,18% dos isolados de Enterobacter aerogenes; e por fim, 28,57% dos isolados de Morganella sp apresentaram simultaneamente Amp C e ESBL, assim como 9,09% dos isolados de Enterobacter aerogenes. Na identificação das β-lactamases, destacou-se a predominância da β-lactamase do tipo CTX-M (62,6%), principalmente em Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Serratia sp. e Proteus mirabilis, seguida da TEM, com uma percentagem de 56,7%. Em Klebsiella penumoniae foi notória a elevada percentagem dos três tipos de β-lactamases estudadas (CTX, TEM e SHV). Aquando da realização da genotipagem, foram identificados 5 clones em Klebsiella pneumoniae e 8 clones em Escherichia coli.

It is well known the important revolution in global health, when antibiotics were discovered, especially in terms of decreasing the suffering caused by bacterial infections, being responsible for saving lives. However, the inclusion of antimicrobial agents and the consequent emergence of resistances - acquired by bacteria over time as a result of their adaptation by continuous exposure - is one of the most globally problematic health issues. The continuous development and spread of disease organisms resistant to antimicrobial agents is an increasing concern. Many of the advances in drug therapy of the last century may have been lost through the spread of antimicrobial resistance. As a result, many diseases arising from infections may, in the near future, become uncontrollable, spreading throughout the world. In the family of Enterobacteriacea, the production of β-lactamases, including β- lactamases extended spectrum (ESBL - Extended Spectrum Beta Lactamases), is an important mechanism of resistance to β-lactam antibiotics. In this work, it was studied 204 multiresistant isolates from Enterobacteriacea family, from the Hospital of the University of Coimbra. We proceeded to search, using phenotypic Kirby-Bauer’s method, the presence of ESBLs and Amp C, then using the phenotypic method of polymerase chain reaction (PCR) followed by electrophoresis to identify the existing β-lactamases (TEM, SHV and CTX-M). Finally, it was proceeded to the genotyping of isolates with the aim of verifying the genetic variability. The prevalence of ESBL and Amp C by the phenotypic method was: only Amp C in 100% isolates of Serratia sp, 50% isolates of Citrobacter sp, 50% isolates of Morganella sp, 40% isolates of Enterobacter cloacae and 45.54% isolates of Enterobacter aerogenes; only ESBL in 59.52% isolates of Escherichia coli, in 70.18% isolates of Klebsiella pneumoniae, in 100% isolates of Enterobacter gergoviae, in 20% isolates of Enterobacter cloacae and in18.18% isolates of Enterobacter aerogenes; and finally 28.57% of the isolates of Morganella sp presented simultaneously Amp C and ESBL and 9.09% in isolates of Enterobacter aerogenes. In the identification of β-lactamases, we highlight the predominance of β-lactamase CTX-M-type (62.6%), mainly in Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Serratia sp. and Proteus mirabilis, followed by TEM, with a percentage of 56.7%. In Klebsiella pneumoniae was notoriously the high proportion of the three types of β- lactamases studied (CTX, TEM and SHV). Upon completion of the genotyping, there were identified 5 clones in Klebsiella pneumonia and 8 clones in Escherichia coli.