Please use this identifier to cite or link to this item: https://hdl.handle.net/10316/17606
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dc.contributor.advisorRamos, Fernando Jorge-
dc.contributor.advisorPais, Alberto António Caria Canelas-
dc.contributor.advisorTeixeira, Helena Maria Sousa F.-
dc.contributor.authorLeite, Marta Sofia Carvalho Ferreira Malheiro-
dc.date.accessioned2011-11-15T17:00:05Z-
dc.date.available2011-11-15T17:00:05Z-
dc.date.issued2011-11-
dc.identifier.citationLeite, Maria Sofia Carvalho Ferreira Malheiro - Desenvolvimento e optimização de uma metodologia analítica para determinação de a e B-amanitina em urina humana por LC-MS/MS. Coimbra, 2011por
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/10316/17606-
dc.description.abstractA colheita de cogumelos silvestres é uma prática ainda muito presente nos dias de hoje, por todo o mundo. Apesar do consumo da maioria dos cogumelos silvestres existentes ser inofensiva para o ser humano, existem algumas espécies que possuem na sua constituição substâncias tóxicas, cuja penetração no organismo, via tracto digestivo, causa o desenvolvimento de efeitos nocivos em diferentes tecidos. O envenenamento por cogumelos Amanita é uma rara mas séria causa de intoxicação humana fatal. As amatoxinas, um grupo de octapeptídeos biciclícos produzidas pela espécie Amanita phalloides, são responsáveis pela elevada toxicidade destes fungos, sendo a α-amanitina e a β-amanitina as toxinas letais maioritárias. Estas causam necrose celular, especialmente no fígado e nos rins, conduzindo à morte por falência hepática e insuficiência renal aguda. O presente trabalho teve como objectivo o desenvolvimento, optimização e aplicação de uma metodologia analítica por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa sequencial (LC-MS/MS), após um pré-tratamento para precipitação de proteínas por solvente orgânico e procedimento de extracção em fase sólida (SPE), para a determinação das amatoxinas α- e β-amanitina, em amostras de urina humana. Os parâmetros de validação definidos para este método englobaram linearidade, limites de detecção (LD) e de quantificação (LQ), selectividade, sensibilidade, repetibilidade e recuperação da extracção, de forma a garantir fiabilidade nos resultados analíticos obtidos. O método desenvolvido provou ser específico e selectivo, com valores de LD e LQ para a α-amanitina de 1.93 e 3.29 ng/mL e para a β-amanitina de 1.74 e 3.16 ng/mL, respectivamente. A lineariedade estudada em amostras fortificadas foi satisfatória (0.97 para a α-amanitina e 0.98 para a β-amanitina) num intervalo de 5 a 20 ng/mL. A repetibilidade foi verificada ao nível de 10 ng/mL (n=3) de α- amanitina e β-amanitina em amostras de urina fortificadas, com coeficientes de variação obtidos de 3.68 e 2.33%, respectivamente. A recuperação do método extractivo desenvolvido apresentou bons resultados para as baixas concentrações RESUMO xii analisadas, com percentagens entre os 64 e 70% para a α-amanitina, e entre os 64 e 68% para a β-amanitina. A metodologia descrita foi, posteriormente, aplicada a uma amostra real de urina de cadáver, disponibilizada pelo Serviço de Toxicologia Forense da Delegação do Centro do Instituto Nacional de Medicina Legal (INML, I.P.). A análise da amostra forense em questão visou demonstrar a capacidade da metodologia desenvolvida para aplicação e implementação em casos reais de intoxicação por amatoxinas. A metodologia analítica desenvolvida tanto a nível de extracção, como de sistema cromatográfico, é inovadora, apresentando um elevado potencial na identificação e detecção de α- e β-amanitinas em amostras de urina. O método descrito poderá ser aplicável à determinação de α- e β-amanitinas a outras amostras biológicas, como fígado e rins. Palavras-chave: α-Amanitina; β-Amanitina; Intoxicação; SPE; LC-MS/MSpor
dc.language.isoporpor
dc.rightsopenAccesspor
dc.titleDesenvolvimento e optimização de uma metodologia analítica para a determinação de a-e B-amanitina em urina humana por LC-MS/MSpor
dc.typemasterThesispor
dc.peerreviewedYespor
item.openairetypemasterThesis-
item.languageiso639-1pt-
item.openairecristypehttp://purl.org/coar/resource_type/c_18cf-
item.cerifentitytypePublications-
item.grantfulltextopen-
item.fulltextCom Texto completo-
crisitem.advisor.researchunitCQC - Coimbra Chemistry Centre-
crisitem.advisor.parentresearchunitFaculty of Sciences and Technology-
crisitem.advisor.orcid0000-0002-6043-819X-
crisitem.advisor.orcid0000-0002-6725-6460-
crisitem.advisor.orcid0000-0001-7570-5521-
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FCTUC Química - Teses de Mestrado
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