Determinação de medicamentos antiepilépticos e anticonvulsivantes por UPLC-MS/MS

Abstract

Os fármacos antiepilépticos (AED’s) são um grupo de substâncias muito heterogéneo, com mecanismos de acção distintos, ou uma combinação de vários mecanismos de acção. Os AED’s são sobretudo utlizados numa combinação que conjuga quase sempre dois ou mais fármacos deste grupo terapêutico. Este trabalho quis desenvolver um método analítico onde se pudesse fazer a determinação simultânea de doze AED’s (Carbamazepina, Felbamato, Fenobarbital, Fenitoína, Gabapentina, Lamotrigina, Levetiracetam, Oxcarbazepina, Primidona, Rufinamida, Topiramato e Zonisamida). O desenvolvimento do método traduziu-se na fortificação de amostras de sangue (0,1 mL) com um padrão interno, seguida de extracção em fase sólida com recurso a colunas Oasis HLB (Waters). A análise foi feita através da injecção de 10 μL do extracto num sistema UPLC-MS/MS (Waters) e nebulização por Electrospray. A separação cromatográfica foi obtida com uma coluna ACQUITY UPLC® HSS T3 (2,1 x 100 mm I.D., 1,8 μm) (Waters), utilizando uma fase móvel composta por acetonitrilo e ácido fórmico a 0,1 %, em gradiente, com um fluxo de 0,5 mL/min. As amostras foram quantificadas após adição do padrão interno, monitorizando as respectivas transições iónicas (MRM) para cada AED. O método foi validado de acordo com o procedimento em vigor no serviço de toxicologia forense da delegação do centro do Instituto Nacional de Medicina Legal, I.P.. Os parâmetros de validação estudados incluíram, entre outros, a linearidade, precisão, exactidão, selectividade, limites de quantificação e detecção. O método mostrou ser adequadamente sensível e selectivo para os 12 AED’s, obtendo-se também um desempenho linear para a gama de trabalho compreendida entre 50 e 5000 ng/mL, sempre com um coeficiente de correlação superior a 0,9925. Não foi detectado nenhum fenómeno de arrastamento ou efeito de matriz relevante. Foi obtido um método rápido e que serve o propósito para que foi criado, capaz de detectar, identificar e quantificar simultaneamente as doze substâncias estudadas.