Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10316/81423
Title: Influenza A virus modulation of cytokines release from macrophages
Other Titles: Modulação da secreção de citoquinas em macrófagos pelo vírus influenza A
Authors: Perdigão, Joana Filipa Almeida 
Orientador: Girão, Henrique Manuel Paixão dos Santos
Amorim, Maria João Lopes Gonçalves de Bito
Keywords: TNF-alfa; Vírus Influenza A; Macrófagos; Citoquinas; Rab11; TNF-alpha; Influenza A virus; Macrophages; Cytokines; Rab11
Issue Date: 8-Sep-2017
Serial title, monograph or event: Influenza A virus modulation of cytokines release from macrophages
Place of publication or event: Instituto Gulbenkian de Ciência
Abstract: O fator de necrose tumoral alfa (TNF) é uma citoquina pleiotrópica produzida por diversos tipos celulares. Esta proteína tem um papel fundamental quer em indivíduos saudáveis quer em indivíduos doentes. Os macrófagos são os principais produtores de TNF quando estes sofrem algum tipo de insulto. A secreção de TNF por parte dos macrófagos é essencial na indução de uma resposta pro-inflamatória que irá travar o insulto sofrido. Em macrófagos ativados, o TNF é transcrito de novo, traduzido em ribossomas ligados ao reticulo endoplasmático e transportado para a membrana plasmática usando vias de secreção específicas. Uma vez chegado à superfície celular, o TNF sofre clivagem proteolítica por parte da proteína TACE. Para chegar à superfície celular, tem sido descrito que o TNF usa a via da reciclagem ligando-se a uma proteína GTPase conhecida por Rab11.O vírus influenza A (IAV) é um importante patogeno humano, responsável por causar doença respiratória aguda provocando epidemias sazonais e pontualmente algumas pandemias. Tal como qualquer outro vírus, o IAV usa em sua vantagem, toda a maquinaria do hospedeiro em cada passo do seu ciclo viral. Durante a infeção, o IAV usa a via da reciclagem para transportar os seus vRNPs até à superfície ligando-se a uma pequena GTPase, a Rab11. Esta ligação causa severas alterações nesta via de secreção, irrompendo com o normal funcionamento das vesículas o que leva à formação de agregados vesiculares. O objetivo último deste trabalho foi combinar estes dois conceitos e compreender se macrófagos infetados têm uma secreção deficiente em TNF. Parte deste projeto requereu a caracterização da infeção em macrófagos e a confirmação relativamente à importância da Rab11 no transporte de vRNPs neste novo sistema. Assim fomos investigar se o uso da Rab11 por parte do vírus no transporte de vRNPs representa uma estratégia para evadir o sistema imune do hospedeiro através da analise da secreção de TNF em macrófagos infetados por IAV. Os nossos resultados indicam que os macrófagos Raw264.7 são permissivos à infeção viral e que os vRNPs são transportados até à superfície celular através de vesículas de Rab11 nestas células. No entanto, a nossa analise indica fortemente que o TNF não depende da Rab11 para ser transportado até à membrana plasmática nos macrófagos usados. As nossas conclusões são baseadas no uso de diversas estirpes do vírus que modulam diferentes níveis da expressão de TNF através da supressão da resposta imune inata do hospedeiro.
Tumour necrosis factor (TNF-) is a pleiotropic cytokine produced by several types of cells and it plays fundamental roles in the healthy and diseased organism. Macrophages are the primary producers of TNFα upon injury, and its secretion is essential to the induction of a pro-inflammatory state necessary to resolve the assault. In activated macrophages, upon sensing an assault, TNFα is transcribed de novo, translated in ribosomes attached the endoplasmatic reticulum (ER) and transported to the plasma membrane using specific arms of the secretory pathway to be secreted upon cleavage by the protease TACE. It was reported that TNF- was transported to the cell surface using the recycling endosome pathway and requiring the small GTPase Rab11.Influenza A virus (IAV) is one of the most important human pathogens responsible for acute respiratory disease provoking seasonal epidemics and periodic pandemics. As any other virus, IAV must use the host machinery for every stage of its viral life-cycle. It was shown that during infection, IAV hijacks the recycling endosome to transport progeny RNAs (vRNPs) to the surface, requiring the small GTPase Rab11. vRNP binding to Rab11-vesicles causes alterations to the pathway, impairing the flow of vesicles and originating vesicular clustering.The goal of this work was to merge both concepts to understand infected macrophages were deficient in the secretion of TNF. Part of the project required the characterization of infection in macrophages and the elucidation of whether Rab11 was required to transport vRNPs in this system. Subsequently our aim was to investigate if the viral usage of Rab11 was in addition to transporting vRNPs a strategy for immune evasion, by analysing if TNF trafficking in macrophages was modulated by IAV infection. Our results indicate that Raw macrophages are permissive to viral infection and that the vRNPs are transported by Rab11-positive vesicles to reach the cell surface in these cells. However, our data strongly suggest that TNF trafficking in macrophages does not rely on Rab11. Our conclusions were based in the usage of several viral strains that modulate at different levels the TNF expression by suppressing to distinct extents innate immune responses from the host.
Description: Dissertação de Mestrado em Investigação Biomédica apresentada à Faculdade de Medicina
URI: http://hdl.handle.net/10316/81423
Rights: openAccess
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