Avaliação post-mortem de etanol em bílis: validação de metodologia analítica por GC-HS-FID e avaliação da correlação com sangue e humor vítreo

Abstract

The increasing consumption of alcoholic beverages leads to a greater control of the application of the laws associated with the consumption of this substance, being necessary the quantification of ethanol by the accredited services for that purpose. The non-viability of blood samples leads to a constant search for alternative samples, such as bone marrow, bile, etc.The objective of this work was, in the first phase, to validate a methodology capable of detecting and quantifying ethyl alcohol in bile samples. For the development of this methodology , the technique of gas chromatography with a flame ionization detector was used, injecting the samples into the system through a headspace injector (HS-GC / FID). In the second phase of this work the method developed and validated in real cases was applied, and a comparative analysis was carried out with blood and vitreous humor samples, in order to establish a correlation.The study comprised the study of all parameters referenced in the validation procedure of quantitative methods in force in the Forensic Chemistry and Toxicology Service of the Delegation of the Center of the National Institute of Forensic Medicine and Forensic Sciences, consisting of the study of selectivity, linearity, Detection and quantification,accuracy,robustness,carryover and stability. After analyzing the obtained results, the suitability of the analytical method developed was concluded. In this way, it was possible to apply the validated methodology to real cases.The application of the validated methodology in real cases of bile samples allowed us to establish a correlation within blood and vitreous humor samples, and a correlation coefficient of 0.96 was obtained for the bile/blood samples, approximately 0.90 for samples Of blood/vitreous humor and 0.80 for the bile/vitreous humor samples, and it is also possible to conclude that the bile samples are good matrices for quantification of ethanol, although caution is always necessary when we extrapolate.

O consumo crescente de bebidas alcoólicas leva a que haja um maior controlo da aplicação das leis associadas ao consumo desta substância, sendo necessária a quantificação de etanol pelos serviços acreditados para o efeito. A não viabilidade das amostras de sangue leva à constante procura de amostras alternativas, tais como medula óssea, bílis, etc.O objectivo do trabalho consistiu, numa primeira fase, a validação de uma metodologia capaz de detectar e quantificar álcool etílico em amostras de bílis. Para o desenvolvimento da respectiva metodologia recorreu-se à técnica de cromatografia em fase gasosa com um detector de ionização de chama, sendo as amostras injectadas no sistema através de um injector de headspace (HS-GC/FID). Na segunda fase deste trabalho aplicou-se o método desenvolvido e validado a casos reais, realizando-se uma análise comparativa com amostras de sangue e humor vítreo, de forma a procurar estabelecer uma correlação.O trabalho compreendeu o estudo de todos os parâmetros referenciados no procedimento de validação de métodos quantitativos em vigor no Serviço de Química e Toxicologia Forense da Delegação do Centro do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, consistindo no estudo da selectividade, linearidade, limites de detecção e quantificação, precisão, exactidão, robustez, carryover e estabilidade. Após a análise dos resultados obtidos concluiu-se a adequabilidade do método analítico desenvolvido. Desta forma, foi possível a aplicação da metodologia validada a casos reais. A aplicação da metodologia validada em casos reais de amostras de bílis permitiu estabelecer uma correlação com amostras de sangue e de humor vítreo, tendo sido obtidos um coeficiente de correlação de 0,96 para as amostras de bílis/sangue, aproximadamente 0,90 para amostras de sangue/humor vítreo e 0,80 para as amostras de bílis/humor vítreo, sendo permitido concluir que as amostras de bílis são boas matrizes para quantificação de etanol, embora seja sempre necessário uma cautela na extrapolação.