Polimorfismo do gene PNPLA3 : fator de risco para o desenvolvimento de doença hepática alcoólica (DHA)

Abstract

A DHA constitui uma das principais causas de doença hepática crónica, sendo responsável por elevadas taxas de morbilidade e mortalidade, na população mundial. Portugal ocupa o 8º lugar do ranking mundial no consumo de bebidas alcoólicas. Cerca de 1 milhão de portugueses é considerado bebedor excessivo e 500 mil são considerados doentes alcoólicos crónicos. No entanto, nem todos os consumidores excessivos desenvolvem DHA e apenas 10-15% daqueles que a desenvolvem atingem os estádios mais graves de doença hepática. O desenvolvimento de DHA depende de diversos fatores: dose, duração e horário diário da ingestão alcoólica, tipo de bebida, género, genética, etnia, estado nutricional, fatores imunológicos e patologias concomitantes. Dos referidos, os fatores genéticos apresentam--se como responsáveis por cerca de 50% da suscetibilidade individual para o desenvolvimento da DHA. Recentemente foi identificado um SNP (single-nucleotide polymorphism) do gene adiponutrin/patatin-like phospholipase-3 (PNPLA3), responsável pela mutação em rs738409 C>G, mutação associada ao desenvolvimento de DHA. O presente estudo objetiva: 1- Estudar a prevalência do SNP rs738409 do gene PNPLA3 numa população de bebedores excessivos portugueses; 2- Verificar a relação entre a prevalência de doentes alcoólicos com DHA e a frequência do polimorfismo em questão. 3- Verificar a associação entre a frequência do SNP rs738409 do gene PNPLA3 e prevalência de estádios mais avançados de DHA. Com este projeto de investigação os autores propõem um estudo inovador em Portugal, avaliando a prevalência do SNP rs738409 do gene PNPLA3 na população com maior risco de DHA em Portugal: alcoólicos crónicos e bebedores excessivos. Este projeto de investigação conta com a colaboração dos Serviços de Medicina Interna e de Gastrenterologia dos Hospitais da Universidade de Coimbra (Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra, EPE) (HUC-CHUC), da Unidade de Alcoologia de Coimbra (UAC), do Instituto de Genética Médica da FMUC e do Laboratório de Bioestatística e Informática Médica da FMUC. Envolve a utilização de dados de saúde pessoais e a recolha de amostras biológicas, sendo garantido anonimato e confidencialidade dos dados, de acordo com os princípios éticos e deontológicos. Serão definidos grupos homogéneos de doentes alcoólicos com DHA, que irão constituir o "grupo casos" e de indivíduos alcoólicos sem DHA, que irão constituir o "grupo controlo". Os indivíduos que constituem o "grupo casos", serão divididos em 2 subgrupos: doentes com lesão hepática alcoólica pré-cirrose e doentes com cirrose hepática alcoólica. A recolha dos dados clínicos será feita através de entrevista, questionário CAGE e consulta do processo clínico de cada doente para obtenção de dados laboratoriais e imagiológicos. A análise genética para identificação do SNP rs738409 do gene PNPLA3 será feita através do método de PCR-RFLP com a enzima de restrição BtsCI (New England BioLabs). Com a realização deste projeto de investigação pretende-se alargar o conhecimento sobre a relação do SNP rs738409, polimorfismo do gene PNPLA3, e o desenvolvimento da DHA. O estabelecimento de uma associação entre estas duas entidades permitirá uma abordagem diagnóstica e terapêutica mais otimizada e dirigida, através da identificação de ferramentas de diagnóstico precoce e de novos alvos terapêuticos.

The ALD is a major cause of chronic liver disease and is responsible for high rates of morbidity and mortality in the population. Portugal occupies the 8th place in the world ranking of alcohol consumption. Approximately 1 million of Portuguese are heavy drinkers and 500 thousand are considered chronic alcoholics. However, not all heavy drinkers develop ALD and only 10-15% reach the most severe stages of liver disease. The development of ALD depends on several factors: dose, duration and timing of daily alcohol intake, beverage type, gender, genetics, ethnicity, nutritional status, immunological factors and concomitant pathologies. Of these, the genetics factor is responsible for about 50% of the individual susceptibility to the development of ALD [6]. Recently was identified a SNP (single-nucleotide polymorphism) in adiponutrin/patatin-like phospholipase-3 gene (PNPLA3), responsible for the mutation in rs738409 C>G, a mutation associated to the development of ALD. The objectives of this research project are: 1 - Study the prevalence of SNP rs738409 from PNPLA3 gene in a Portuguese heavy drinkers population. 2 - Check the relationship between the prevalence of alcoholic patients with ALD and the frequency of this polymorphism in question. 3 - Check the relationship between the frequency of SNP rs738409 from PNPLA3 gene and the prevalence of advanced stages of ALD. With this research project the authors propose a pioneering study in Portugal, assessing the prevalence of SNP rs738409 from PNPLA3 gene in the population that has a higher risk of developing ALD in Portugal, heavy drinkers and alcoholics. This research project will count with the collaboration of the Internal Medicine and the Gastroenterology Services, of Hospitais da Universidade de Coimbra (Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra, EPE) (HUC-CHUC), Unidade de Alcoologia de Coimbra (UAC), the Institute of Medical Genetics and the Laboratory of Biostatistics and Informatics Medical of FMUC and all the work will have supervision of FMUC. This research project involves the use of personal health information and the collection of biological samples, being guaranteed anonymity and confidentiality of data in accordance with the ethical and deontological principles. Will be defined homogenous groups of patients with alcoholic ALD which will constitute the "cases group" and alcoholic individuals without ALD, which will constitute the "control group". The individuals that constitute the "group case" will be divided into 2 subgroups: patients with alcoholic liver injury pre-cirrhosis and patients with alcoholic liver cirrhosis. The collection of clinical data will be made by interview, CAGE questionnaire and consultation of clinical processes of each patient to obtain laboratory and imaging data. The genetic analysis to identify the SNP rs738409 from PNPLA3 gene will be made using the PCR-RFLP method with the BtsCI restriction enzyme (New England BioLabs ). With the execution of this research project it is intended to amplify the knowledge about the relationship of the SNP rs738409, a PNPLA3 gene polymorphism, and the development of ALD. Getting relate these two entities will be possible a more targeted action for a clear diagnosis and treatment, with identification of new therapeutic targets and selection of proper therapy, and a action on prevention, through the development of susceptibility testing and adopting measures preventive.