Development and validation of an analytical methods for quantification of 15 non-tricyclic antidepressants in serum with UPLC-MS/MS

Abstract

Objectivo: Antidepressivos não-tricíclicos são frequentemente encontrados em casos de overdose, e para alguns, a monitorização terapêutica tem de ser garantida. Assim sendo, foi desenvolvido e validado um método com cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa sequencial para a quantificação de 15 antidepressivos não tricíclicos comuns em soro: citalopram, desmetilcitalopram, desmetilfluoxetina, desmetilvenlafaxina, duloxetina, fluoxetina, fluvoxamina, melitracene, mianserina, mirtazapina, paroxetina, reboxetina, sertralina, trazodone e venlafaxina. Os fármacos selecionados também contêm (nor) tramadol (adicionado devido à sua interferência com desmetilvenlafaxine) e todos os antidepressivos não tricíclicos disponíveis na Bélgica.Métodos: Amostras de soro (250 μL) foram precipitadas com metanol e acetonitrilo que contem 5 ng de cada padrão interno: mirtazapine-d4, paroxetine-d5, reboxetine-d6 e venlafaxine-d6. O sobrenadante foi evaporado a 56ºC sob um fluxo de nitrogénio e reconstituído em 100 μL de 50:50 metanol:água com 2 mM de acetato de amónio. 5 μL foram injectados e os analitos separados numa coluna 100 × 2.1 mm ACQUITY BEH C18 (Waters, Zelik, Bélgica), usando o sistema Waters ACQUITY Cromatografia Líquida de alta pressão. Os analitos foram eluídos em 7.5 min, usando um gradiente de 0.2% de acetato de amónio e 0.1% de ácido fórmico em água e metanol a um fluxo de 0.4 mL/min. A quantificação foi efectuada usando o equipamento Waters quadropolo triplo ACQUITY TQD, com monitorização de reacção múltipla em modo positivo (2 MRM’s por analito). Uma curva de calibração de seis pontos foi usada, de modo a englobar concentrações de 10 ng/mL a 1000 ng/mL. O método foi validado baseado no guia do Scientific Working Group for Forensic Toxicology (SWGTOX). Resultados: Não foram encontradas interferências da matriz, padrões internos ou medicamentos antidepressivos tricíclicos e o método provou ser selectivo para todos os compostos. Limites de quantificação e de detecção vão desde 10 a 85 ng/mL e 2.0 a 28 ng/mL, respectivamente. Supressão iónica dos efeitos de xi Resumo matriz variam de 36 a 108% para os compostos e de 47 a 102% para os padrões internos. A eficiência do processo varia desde 22 a 106%. A imprecisão intra e inter-ensaios varia desde 3.5 a 12.3% e 3.1 a 12.3%, rescpectivamente. A inexactidão foi mais baixa que 15% para todos os compostos, excepto para as concentrações mais baixas de desmetilcitalopram, tramadol e trazodone (exactidão < 20%). Não foram observados fenómenos de arrastamento. Conclusão: Uma boa validação foi obtida graças ao uso de padrões internos deuterados que se ajustaram a todos os compostos de modo a compensar a variabilidade global do método. Este método é então adequado tanto a monitorização terapêutica como a quantificação nos casos de suspeita de overdose. Palavras-chave: fármacos psicotrópicos; soro; quantificação; validação; LCMS/ MS; TQD