Caracterização do perfil genómico do Cancro da Bexiga - Contribuição para o desenvolvimento de uma metodologia de diagnóstico e monitorização molecular

Abstract

O cancro da bexiga (CB) é considerado uma das neoplasias mais comuns do tracto urinário sendo a quarta neoplasia mais frequente no sexo masculino e a décima quarta no sexo feminino, correspondendo a cerca de 5 a 10% do total de neoplasias na Europa. A principal problemática associada ao CB é a elevada taxa de recidiva. Cerca de 50 a 80% dos tumores superficiais irão apresentar recidivas e cerca de 10-15% irão progredir para formas neoplásicas mais agressivas, num período de cinco anos. Deste modo, o principal objectivo da investigação nesta área passa pelo desenvolvimento e aperfeiçoamento de metodologias que permitam o diagnóstico e a detecção de recidivas desta neoplasia o mais precocemente possível e de forma eficaz. Actualmente, já se encontram disponíveis alguns biomarcadores, contudo estes apresentam baixas taxas de sensibilidade e especificidade. Os principais objectivos deste estudo foram a caracterização do perfil genómico do CB bem como o estudo do estado de metilação de genes relacionados com esta neoplasia. Por outro lado, pretendeu-se também avaliar a capacidade de utilização da urina como material biológico para uma metodologia não invasiva na obtenção de células tumorais. Neste estudo foram estudadas 14 biópsias tumorais por MLPA e MSMLPA, das quais 13 foram também avaliadas por aCGH. A urina correspondente a 12 das 14 amostras foram também avaliadas por MLPA. Verificou-se a existência de padrões de alterações muito evidentes entre as amostras estudadas. Por MLPA, as alterações mais frequentes corresponderam a perdas nos cromossomas 7q, 9p, 9q e 17q e ganhos nos cromossomas 3p, 3q, 7p, 10q, 17q e 20q. Por outro lado, por MS-MLPA foi possível detectar uma elevada taxa de incidência de perdas associadas ao gene TP53. Os genes MSH6, PAX5 e KLLN apresentaram-se muito frequentemente metilados nas amostras estudadas. Por aCGH foi igualmento possível identificar padrões de alterações muito evidentes, porém a sua associação com o estadio e o grau tumoral não foi clara. Quanto ao estudo por MLPA de amostras provenientes de urina, foi possível obter resultados estatisticamente significativos para vários genes. Deste modo, a utilização da urina como metodologia não invasiva para o estudo e caracterização tumoral, mostra-se extremamente promissora.

Bladder cancer (BC) is one of the most common malignancies of urinary tract being the fourth most common neoplasia in men and the fourteenth in woman, accounting with 5 – 10% of all malignancies in Europe. Bladder tumors have high recurrent rates and 50 to 80% of superficial tumors will recur and 10 to 15% will progress to more aggressive neoplasias, within five years. The main goal of research in this field is to optimize or develop new strategies that will allow an early and efficient diagnosis and a detection of recurrences. Nowadays, there are some biomarkers that can be used in clinical practice, however these markers have low sensitivity and specificity rates. The main goals of this study were the characterization of the genomic profile of bladder cancer and the evaluatation of the methylation profile of some genes related with this neoplasia. On the other hand, in this study the ability of using urine as a source of bladder cancer cells for a non-invasive method was evaluated. 14 tumor biopsies were studied by MLPA and MS-MLPA, which 13 were also studied by aCGH. Urine from 12 of 14 studied samples, were also studied by MLPA. Some genetic and epigenetic alterations patterns were identified. By MLPA, the most common changes were losses in chromosomes 7q, 9p, 9q and 17q and gains in chromosomes 3p, 3q, 7p, 10q, 17q and 20q. On the other hand, by MS-MLPA a high frequencies of losses of TP53 gene were detected. MSH6, PAX5 and KLLN genes showed a high methilation rate. By aCGH some genetic alterations patterns were also detected, however their association with tumor stage and grade were not clear. The study of urine samples by MLPA revealed concordance, with statistical significancy for some genetic alterations. Thus, the use of urine as a non-invasive strategy for bladder tumor study and characterization is very promising.